如何解决色谱柱使用过程出现的问题

更新时间:2023-11-07      点击次数:1613

问题:                                      

不同色谱柱间差异  
使用期间柱变化  
原因:    
填料、键合不相同  
柱床破坏  
键合相丢失  
硅胶基质溶解  
强保留组分堆积堵塞  
表现:  
保留因子(k),分离因子(α)  
柱效(N)  
保留因子(k),分离因子(α)  
柱效(N)  
保留因子(k),柱效(N)  
问题:   
柱外效应  
原因:  
系统差异、进样量大、进样阀与色谱柱之间、色谱柱与检测器之间的管路太长、检测器流通池体积大、接头死体积大等。   
表现:  
柱效(N)  
问题:  
分离效果变差   
原因:  
流动相组分改变  
流速改变  
温度改变  
表现:  
保留因子(k),柱效变化很小  
保留因子(k),分离因子(α)  
保留因子(k),柱效变化很小  
问题:  
柱平衡慢  
原因:  
重新平衡时间不够   
柱超载 样品量太大   
表现:  
保留因子(k),柱效变化很小  
保留因子(k),柱效(N)  
造成色谱峰( 不对称)拖尾的原因  
1.色谱柱本身填装问题,筛板堵塞或填料塌陷;  
2.柱头有污染;  
3.样品超载;  
4.样品溶剂不合适;  
5.柱外效应;  
6.化学或二次保留(硅羟基)效应;  
7. 缓冲容量不足或不合适;  
8. 重金属污染。  
如何解决峰形拖尾的问题  
A. 与化学有关的拖尾问题  
1.流动相中,加入30mM的三乙胺(用于碱性化合物)或醋酸胺(用于酸性化合物), 未知化合物加醋酸三乙胺;  
2.如仍然拖尾,将三乙胺换为二甲基辛胺(或醋酸二甲基辛胺);  
3.降低进样量至<1μg。  
B. 与色谱柱有关的拖尾问题  
1.如柱头处有强保留的样品组分积聚,反相柱可用20倍柱体积的96%的二氯甲烷与4%甲醇,加1%氢氧化铵混合液冲洗;正向柱可用甲醇冲洗;  
2.使用保护柱。  
C. 与HPLC系统有关的峰拖尾和峰加宽  
1.进样体积过大,(通常≤25μL);  
2.进样阀与色谱柱及检测器之间的管路体积过大(连接管应<20cm,内径为0.007");  
3.检测器流通池的体积过大。


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