取 10mL 乳制品样品于 50mL 离心管中。
加入 5mL 10% 的三氯醋酸溶液作为沉淀剂,充分振荡 10 分钟(振荡速度为 200r/min),使蛋白质充分沉淀。
将离心管放入离心机中,以 4000r/min 的转速离心 15 分钟。
离心结束后,小心取出上清液,即为处理后的样品,此步骤可有效去除样品中的蛋白质等干扰物质。
标准溶液配制:准确称取一定量的三聚氰胺标准品,用超纯水溶解并定容,配制一系列不同浓度的三聚氰胺标准溶液(0.1mg/L、0.5mg/L、1mg/L、5mg/L、10mg/L)。
荧光探针溶液配制:将量子点溶于磷酸盐缓冲溶液(pH=7.0)中,配制浓度为 2μmol/L 的量子点荧光探针溶液。
反应体系构建:分别取 2mL 不同浓度的三聚氰胺标准溶液和处理后的样品溶液于比色管中,各加入 2mL 量子点荧光探针溶液,充分混合均匀。
反应条件控制:将比色管置于 25℃恒温水浴中反应 20 分钟,控制反应体系的 pH 值为 7.0。
便携式荧光比色计检测:反应结束后,将比色管中的溶液倒入便携式荧光比色计的比色皿中,设置激发波长为 365nm,发射波长为 520nm,测定溶液的荧光强度。
数据处理与结果分析:以三聚氰胺标准溶液的浓度为横坐标,对应的荧光猝灭程度(空白荧光强度与样品荧光强度的差值与空白荧光强度的比值)为纵坐标,绘制标准曲线。根据样品溶液的荧光猝灭程度,从标准曲线上查得样品中三聚氰胺的浓度。
检测限:通过对低浓度三聚氰胺标准溶液进行多次检测,以 3 倍信噪比对应的浓度作为该方法的检测限,经测定,本方法的检测限可达 0.05mg/L,满足乳制品中三聚氰胺的检测要求。
精密度:对同一浓度的三聚氰胺标准溶液进行 6 次平行测定,计算相对标准偏差(RSD),结果显示 RSD 小于 5%,表明该方法具有良好的精密度。
准确度:采用加标回收实验,向已知浓度的乳制品样品中加入不同量的三聚氰胺标准品,进行回收实验,计算回收率,回收率在 85%-115% 之间,说明该方法具有较高的准确度。
特异性:选取乳制品中可能存在的干扰物质,如尿素、葡萄糖、乳糖等,进行特异性实验,结果表明这些干扰物质对三聚氰胺的检测无明显影响,该方法具有良好的特异性。
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