分子生物学实验室开展实时荧光定量 PCR(qPCR)检测时,需对 96 孔板、384 孔板进行批量样品加样,要求移液体积精准(误差≤±2%)、孔间重复性好(CV 值≤1%),同时需避免样品交叉污染,保障扩增结果的准确性与可靠性。传统单通道移液器单次仅能处理 1 个样品孔,完成 96 孔板加样需耗时 1 小时以上,人工操作强度大且易因手法差异导致孔间体积偏差;频繁更换枪头增加了样品污染风险,且移液效率低下,难以满足高通量 qPCR 检测需求。为解决上述痛点,引入 8 通道 / 12 通道可调式移液器,构建 “标准化移液 - 批量加样 - 防污染管控" 的 qPCR 样品前处理体系,提升实验效率与数据稳定性。
选用适配 qPCR 实验的8 通道 / 12 通道可调量程移液器,覆盖移液体积范围 0.5-10μL、10-100μL、100-1000μL,满足不同体系配制需求;移液器采用人体工学设计,配备轻量化手柄与防滑指托,降低长时间操作的手部疲劳;内置量程锁定装置,防止移液过程中量程漂移;枪头适配带滤芯的无菌吸头,有效阻隔气溶胶污染,避免样品间交叉污染;移液精度符合 ISO 8655 标准,小体积移液(10μL)精度 ±1.5%,大体积移液(100μL)精度 ±0.8%,孔间重复性 CV 值≤0.8%,可达到qPCR 实验严苛要求。
针对 qPCR 实验不同环节优化移液参数:
反应体系配制:采用 8 通道移液器,选择 10-100μL 量程,低速吸液(吸液速度调至 2 档)、匀速排液,避免枪头内产生气泡,确保每个反应孔体系体积一致;
样品模板加样:采用 12 通道移液器,选择 0.5-10μL 量程,使用带滤芯吸头,每块 96 孔板更换一次吸头,防止模板气溶胶污染;
标准曲线梯度稀释:采用 8 通道移液器,配合排管架进行批量梯度稀释,减少人工稀释误差,提升标准曲线线性相关系数(R²≥0.999)。
移液前预处理
移液器校准:实验前使用标准砝码对移液器进行校准,确认移液体积精度符合要求;
耗材准备:将带滤芯无菌吸头装入移液器吸头盒,qPCR 反应板、离心管置于超净工作台紫外灭菌 30 分钟;
试剂预混:按 qPCR 反应体系配方,将引物、探针、酶、缓冲液等试剂混合均匀,置于冰浴中备用,避免试剂反复冻融。
批量加样操作
反应体系分装:将 8 通道移液器量程调至目标体积(如 20μL),吸取预混试剂后,垂直对准 96 孔板的 8 个样品孔,匀速排液至孔底,避免液体挂壁;完成一列后平移移液器,依次完成整板体系分装,全程仅需 5 分钟;
样品模板加样:将 12 通道移液器量程调至模板体积(如 5μL),吸取离心管中的样品模板,对应加入 qPCR 反应板的样品孔,加样后轻弹反应板侧壁,使液体充分混合;
防污染管控:加样过程中,移液器枪头避免接触反应孔内壁,每处理完一批样品,及时更换吸头并对移液器吸头连接端进行酒精擦拭消毒。
移液后处理
反应板密封:加样完成后,使用 qPCR 专用封板膜密封反应板,离心去除气泡后放入 qPCR 仪;
移液器清洁:实验结束后,用 75% 酒精擦拭移液器表面,拆卸吸头弹射器进行清洁,干燥后存放于移液器支架上。
移液效率大幅提升:完成一块 96 孔板的加样工作,从传统单通道移液器的 60 分钟缩短至 10 分钟,效率提升 500%,日均可完成 10-15 块 96 孔板的样品前处理,满足高通量 qPCR 检测需求;
实验数据稳定性优化:孔间移液体积偏差从 ±5% 降至 ±1.5%,qPCR 扩增曲线的孔间重复性 CV 值≤1%,标准曲线线性相关系数稳定在 0.999 以上,实验结果准确性与可靠性显著提升;
污染风险有效降低:带滤芯吸头的使用配合严格的操作规范,使样品交叉污染率从 8% 降至 0,杜绝气溶胶污染导致的假阳性结果;
操作强度显著降低:人体工学设计的多通道移液器减少了手部操作频次,降低了实验人员的劳动强度,提升了实验操作的舒适性与便捷性。
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