优化立式高压蒸汽灭菌器针对临床常见病原微生物（细菌、病毒、真菌）的灭菌参数，确保灭菌合格率 100%；
验证不同参数组合下灭菌效果的稳定性与重复性，降低耗材破损率（目标≤1%）；
建立符合生物安全二级（BSL-2）实验室要求的标准化灭菌操作流程，满足合规性需求。
病原微生物样本：选取临床实验室典型高风险病原微生物，制备模拟污染样本：
细菌类：结核分枝杆菌（H37Rv）菌液（浓度 1×10⁶CFU/mL）、金黄色葡萄球菌（ATCC 29213）菌液（1×10⁷CFU/mL）、枯草芽孢杆菌黑色变种（ATCC 9372，芽孢指标菌，1×10⁶CFU/mL）；
病毒类：乙肝病毒（HBV）阳性血清（病毒载量 1×10⁵IU/mL）、新冠病毒（SARS-CoV-2）灭活前样本（模拟样本，含病毒核酸片段）；
真菌类：白色念珠菌（ATCC 10231）菌液（1×10⁶CFU/mL）；
生物指示剂：嗜热脂肪芽孢杆菌 ATCC 7953 菌片（含菌量 1×10⁶-1×10⁷CFU / 片），作为灭菌效果核心判定指标；
耗材与试剂：一次性使用病毒采样管、玻璃离心管（15mL）、血清管、LB 固体培养基、罗氏培养基、细胞培养板、无菌生理盐水、75% 乙醇。
灭菌温度（A）：121℃、125℃、130℃（覆盖常规灭菌与强化灭菌区间，适配不同微生物耐热性）；
保温时间（B）：15 分钟、20 分钟、25 分钟（匹配芽孢、结核分枝杆菌等顽固微生物灭活需求）；
排气方式（C）：重力排气（传统方式）、脉动排气（3 次抽真空 - 注蒸汽循环）、阶段排气（升温段 1 次 + 保温前 2 次）。
分组设置：共 9 个实验组，每组 3 个平行样本，同时设置空白对照组（未污染耗材）与阳性对照组（未灭菌污染样本）；
样本装载：将污染样本与生物指示剂均匀放置于灭菌器腔体（包括腔体角落、上层、下层、门边等易形成死角的位置），装载量不超过腔体容积的 70%，确保蒸汽流通；
灭菌操作：按设定参数启动灭菌程序，全程记录温度、压力变化曲线；
效果检测：
细菌 / 真菌检测：灭菌后取出样本，梯度稀释后接种至对应培养基，37℃培养 48-72 小时，观察菌落生长情况，计算杀灭率；
病毒检测：HBV 样本采用实时荧光定量 PCR 检测病毒核酸残留，新冠病毒模拟样本检测核酸片段，无扩增信号判定为灭活合格；
芽孢检测：生物指示剂接种至 LB 培养基，56℃培养 7 天，无菌落生长判定为灭菌合格；
耗材破损统计：检查玻璃离心管、血清管等耗材的破损情况，计算破损率。
灭菌温度的影响：
121℃时，结核分枝杆菌杀灭率 95%，枯草芽孢杆菌杀灭率 92%，存在灭活不透彻风险；
125℃时，病原微生物杀灭率均达 100%，生物指示剂全部无菌生长，玻璃耗材破损率 0.3%；
130℃时，灭菌效果达标，但玻璃耗材破损率升至 2.8%，且能耗增加 15%，经济性不佳。
保温时间的影响：
15 分钟保温时，腔体角落样本中枯草芽孢杆菌出现阳性生长（杀灭率 94%），灭菌存在死角；
20 分钟保温时，各点位样本均无微生物生长，杀灭率 100%，耗材破损率 0.3%；
25 分钟保温时，灭菌效果无提升，但培养基残渣碳化现象加重，增加灭菌器清洁难度。
排气方式的影响：
重力排气：因冷空气滞留，腔体底部样本杀灭率 95%（结核分枝杆菌残留）；
阶段排气：杀灭率提升至 99%，仍有 1 组枯草芽孢杆菌样本阳性；
脉动排气：透彻排出冷空气，蒸汽穿透力最佳，所有样本杀灭率 100%，无灭菌死角。
结核分枝杆菌培养物无活菌生长，HBV 样本核酸检测无扩增信号，白色念珠菌杀灭率 100%；
灭菌过程参数记录完整，可追溯，符合《医疗质量管理办法》对医疗记录的合规要求。
装载前检查灭菌器密封圈、安全阀状态，确保设备正常运行；
污染样本分类装载，液体样本直立放置，避免泄漏；
脉动排气阶段确认每次抽真空后压力降至 0.02MPa 以下；
灭菌后自然冷却至压力为 0、温度＜80℃时再开启舱门，避免气溶胶溢出；
每月用标准温度计、压力计校准设备，确保参数精度（偏差≤±0.5℃、±0.01MPa）。
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